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吉非罗齐原料药及制剂的有关物质研究
来源
《华西药学杂志》 第39卷 2024，39(1)∶ 084~088
作者
李文莉，程智，傅萍
四川省药品检验研究院
摘要
目的：控制吉非罗齐胶囊中的有关物质。
方法：结合国内外标准研究吉非罗齐原料药及制剂中的有关物质，对抽验样品进行检验并分析结果。
结果：共抽取6家企业共计样品143批次，按法定标准检验，合格率为100%。但现行法定标准无法完全检出吉非罗齐的已知和未知杂质，现建立了专属性更高的杂质检查方法，并通过质谱图，推测出2个未见报道的杂质(吉非罗齐三聚物和吉非罗齐异丁酯)。并进一步发现了从胶囊壳中迁移至药品中的杂质山梨酸。
结论：进一步提高了吉非罗齐原料药的有关物质标准，控制了杂质A和杂质I，参照国外药典建议收紧单个杂质与总杂限度、增订吉非罗齐胶囊的有关物质检查项。
关键词
吉非罗齐; 吉非罗齐胶囊; 国家评价性抽验; 杂质; 有关物质; 胶囊壳; 抑菌剂; 山梨酸钾
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正文
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辉瑞制药开发的吉非罗齐为氯贝丁酸衍生物类血脂调节药，于1981年首先在美国上市，剂型为胶囊剂及片剂[1]。吉非罗齐用于治疗高血脂症，不良反应主要为胃肠道不适。在药物相互作用上，存在较多禁忌，最典型的为拜斯亭事件(即吉非罗齐与西立伐他汀合用引起严重横纹肌溶解症)，西立伐他汀已下市，但应重视吉非罗齐与其他他汀类药物合用引起不良事件的发生，并尽量避免联合使用[2-3]。原研药品未在中国进口注册。国内外涉及吉非罗齐的制剂为胶囊，鲜有对吉非罗齐及制剂有关物质研究的报道。吉非罗齐胶囊列为2018年国家药品监督管理局全国药品质量评价性抽验计划。国内共有7家企业取得吉非罗齐原料药批准文号，39家企业取得吉非罗齐胶囊批准文号，规格均为300mg。吉非罗齐原料药与胶囊的现行标准为2020年版《中国药典》; 另《美国药典》USP43、《欧洲药典》EP11.0、《英国药典》BP2023均收载吉非罗齐原料药，USP43、BP2021同时收载胶囊剂。此次计划性抽检对6家企业的143批次吉非罗齐胶囊的质量进行评价。国家药审中心公布的参比制剂为吉非罗齐胶囊(美国辉瑞，300mg)。吉非罗齐胶囊执行2015年版《中国药典》二部(与2020年版的方法和限度一致)。结果143批次均符合规定，合格率100%。但国内现行吉非罗齐的质量标准仅对杂质I、单个最大杂质以及总杂的限度进行了控制，质控能力不足，现结合BP2018(与BP2023方法和限度一致)对其有关物质进行了深入研究，对有关物质成分进行了扩展并且给出了限度的建议[4]。
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实验部分
1.1 仪器与试药
1260高效液相色谱仪(美国Agilent); 2695高效液相色谱仪(美国Waters); Q-TOF高分辨质谱仪(美国Bruker)。吉非罗齐、杂质I(吉非罗齐甲酯，《美国药典》USP43)、山梨酸钾对照品(中国食品药品检定研究院); 系统适用性试验对照品(含杂质C、D、E，《欧洲药典》EP10.0)、杂质A(2，5-二甲基苯酚，市售); 甲醇为色谱纯; 其余试剂为分析纯。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件
采用Thermo-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以0.3%冰乙酸为流动相A、甲醇为流动相B，梯度洗脱(0~35min、40%A，35~45min、20%A，45~50min、20%~15%A，50~55min、15%A，55~55.1min、15%~40%A，55.1~65min、40%A)，检测波长276nm，进样量10μL，流速1.0mL·min-1。采用MS法对未知杂质的结构进行预测。ESI正、负离子模式，离子扫描范围为m/z50~600，离子源电压为4.5kV，加热模块温度180℃，雾化气流速为1.5bar，干燥气流速8.0L·min-1，质量数校准以外标法校准。
1.2.2 溶液的制备
称取100mg吉非罗齐对照品，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得吉非罗齐对照品溶液; 称取杂质A、I各10mg，分别置10mL量瓶中，加甲醇使溶解并定容，得相应杂质溶液; 取系统适用性试验对照品1支，精密加入1mL乙腈使溶解，得对应溶液; 精密量取杂质A、I对照品贮备液各0.2mL，置同一10mL量瓶中，用吉非罗齐对照品溶液定容，精密量取1mL与对应溶液混合，摇匀，作为混合对照品溶液。取吉非罗齐原料以及混合辅料进行酸破坏实验(2mol·L-1盐酸，于90℃水浴中加热6h)，制得酸破坏溶液。
1.2.3 杂质谱的测定
比较了《英国药典》(BP2018)和《中国药典》中吉非罗齐及其胶囊的杂质检查方法，对BP2018中胶囊有关物质的色谱条件进行了优化，参照其杂质命名，建立有关物质的梯度洗脱HPLC测定法。在优化后的系统中，已知杂质和破坏杂质均得到了有效的分离，且胶囊中的辅料不会干扰。采用酸破坏溶液(产生杂质I)中加入杂质A，作为系统适用性试验溶液，基线分离了已知杂质A、C、I、D、E(图1A)。测定中发现其他杂质多集中为相对保留时间约为0.62和1.70的两个峰位上(图1B)，为与已知杂质区别，暂将其命名为杂质1和杂质2。采用LC-MS法，推测出2个未见报道的吉非罗齐三聚物(杂质B)和吉非罗齐异丁酯杂质(图2)。
图1混合对照品( A) 、原料酸破坏( B) 、有关物质样品测定供试品( C) 溶液的色图谱
Figure 1 HPLC chromatograms of the mixed reference solution ( A) ，raw material acid destruction ( B) and raw material acid destruction solution ( C)
图2 未知杂质吉非罗齐三聚物( A) 和吉非罗齐异丁酯( B) 的典型飞行时间质谱图
Figure 2 Typical time of flight mass spectrograms of Gifelozide trimer ( A) and isobutyl Gemfibrozil ( B)
1.2.4 校正因子的测定
杂质A、E、I有单独的对照品，在BP2018中的校正因子分别为0.5、0.2、1.0。其中，杂质A、I即为工艺杂质，也可为降解杂质，杂质E为工艺杂质，国内的合成路线与欧美的不同，欧美路线中的工艺杂质国内的产品基本不会涉及。采用2台不同品牌高效液相色谱仪(Waters-2695、Agilent 1260)、2根不同品牌的C18色谱柱(Waters Symmetry C18色谱柱、Thermo C18色谱柱)进行比较。精密称取适量吉非罗齐对照品、杂质A、杂质I，加甲醇溶解并制成一定范围的线性溶液，作为校正因子测定溶液。按“1.2.1”项色谱条件，用不同仪器、色谱柱，采用斜率比法对杂质A、I的校正因子进行了测定，结果与BP2018基本一致，可沿用其校正因子(表1)。对建立的有关物质方法还进行了专属性考察、重复性、溶液稳定性等方法学研究工作，结果表明: 吉非罗齐胶囊的辅料对有关物质的检测无干扰。
1.2.5 胶囊壳中山梨酸钾的测定
通过稳定性考察发现，在高湿(25℃、RH90%)条件下，2个厂家的样品，在未带内包装放置情况下，均出现一个未知杂质，并随着放置的天数增加，通过对比杂质的紫外光谱，初步确定为同一未知杂质。通过考察6家企业胶囊涉及的明胶空心胶囊，确定该杂质为胶囊壳在水分变化时发生交联而迁移至内容物中的抑菌剂(山梨酸钾)。采用Waters Thermo C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相0.3%冰乙酸-甲醇(45∶55)，检测波长276nm，柱温45℃，样品温度35℃，进样量为10μL，流速1.0mL·min-1。精密称取约50mg山梨酸钾对照品，置25mL量瓶中，加水溶解并定容，即得对照品贮备溶液。精密称取胶囊壳3粒，置25mL比色管中，加10mL水浸泡5min，涡旋震荡10min，溶液用0.45μm滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。采用上述HPLC法，考察抽验涉及所有批次样品的胶囊壳。A厂家胶囊壳处方中标示含有该成分(处方量0.2%)，测得量0.16%~0.20%; B厂家所有样品(0.07%~0.09%)及C厂家1批样品(0.42%)均检出，这2家企业胶囊壳的处方中均未涉及山梨酸钾; 其他样品均未检出。
1.2.6 吉非罗齐及其杂质毒性的预测
按人用药品技术要求国际协调理事会(ICH) M7的要求，采用定量构效关系技术筛选评估，对具有警戒结构的杂质进行体外基因突变研究。ADMET Predictor软件(Version7.2.0001，Simulations Plus，Inc. ，USA)提供了12个预测模型，预测结果呈阳性，代表该化合物具有潜在致突变性并且预测了化合物染色体变异的可能性。试验对吉非罗齐、9个已知杂质及4个潜在杂质产生不良反应的可能性及多种毒性进行了预测，其中，杂质A的毒性最大(表2)。
1.2.7 有关物质的测定
分别对国内的原料药及获得的1批进口原研制剂进行了有关物质测定。原料药中的工艺杂质较少，且批间及批内的差异不大，杂质A、I更多的时候是制剂过程中产生的工艺杂质; 原研制剂由于所用原料及工艺处方均不同，故杂质情况有所差异，其中，杂质I检出明显，是吉非罗齐胶囊中的主要杂质。按建立的有关物质检查方法对本次抽验的143批次吉非罗齐胶囊进行测定。67批次样品检出杂质A，含量为0.01‰~0.09‰; 12批次样品检出杂质I，含量为0.04‰~0.36‰; 其他单个最大杂质的含量为0.1‰~2.6‰; 杂质总量为0.1‰~2.9‰。1批吉非罗齐胶囊检测不合格(山梨酸0.26%)，合格率为99.3%，不合格率为0.7%(图3)。
图3吉非罗齐胶囊中杂质A( A) 、杂质I( B) 、其他单个最大杂质( C) 、总杂质( D) 的含量统计分析图
Figure 3Statistical analysis chart of impurities A ( A)， impurities I ( B) ，other single maximum impurities ( C) ，and total impurities ( D) in Gemfibrozil capsules
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讨论
建议企业加强对明胶空心胶囊供应方的评估及对胶囊壳与内容物相容性的评价，尽量选用不含抑菌剂的胶囊壳。鉴于吉非罗齐各杂质的毒性及文中检测数据，建议修改及增加吉非罗齐原料药及制剂有关物质的限度。建议杂质A、I的限度参照《英国药典》BP2018，杂质A原料及胶囊的限度校正后均为0.1%，杂质I在原料及胶囊的限度均为0.2%; 其他最大杂质限度参照BP2018原料(0.10%)、BP2018胶囊(0.2%)、《美国药典》USP43原料(0.1%)，在原料中的限度为0.10%，在胶囊中的限度为0.2%; 总杂质限度参照测定结果及BP2018原料(0.5%)、BP2018胶囊(0.5%)、USP43原料(0.5%)，在原料及胶囊中的限度均为0.5%。实验进一步提高了吉非罗齐原料药的有关物质标准，控制了杂质A、I，参照国外药典建议收紧单个杂质与总杂限度、增订吉非罗齐胶囊的有关物质检查项。
参考文献
详见《华西药学杂志》 第39卷 2024，39(1)∶084~088
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